やぶにらみ生物論７８： リソソームとオートファジー

電子顕微鏡で細胞を観察していると、しばしば細胞内に何かわけのわからない内容物を含んだ閉じた袋のような構造体をみかけます。たとえば図１の細胞Ａや細胞Ｂ（ラット真皮の細胞）の矢印の構造体です。矢印以外にも数多くみられます。これらの構造体は外界から取り込んだ固形物や液体、あるいは細胞内で生じた不要物などを集めて分解し、無害化したり、栄養として再利用したりするための、リソソーム（英語ではライソソーム）を主役とした「ごみ処理・再利用システム」の一部と考えられています。

Dermis: 真皮、Dermal sheath: 真皮性毛包、Hair follicle: 毛包

リソソームはすでに１９５０年代にクリスチャン・ド・ドューブ（図３）によって発見されており、ド・ドューブは１９７４年にノーベル賞を受賞しています。彼のグループはラットの肝臓をすりつぶし、遠心力で分画して、マイクロソームとミトコンドリアの中間の画分にリソソームというオルガネラ（細胞内小器官）が存在し、その画分には酸性で稼働する加水分解酵素が多く含まれていることを証明しました。さらにファゴソームと名付けられた小胞が細胞質成分を包み込み、それがリソソームと融合して消化されるというシステムの存在を示唆しました（１、２）。

現在わかっていることを大まかに示すと図２のようになります。細胞膜ではファゴサイトーシスやピノサイトーシス（まとめてエンドサイト－シス）によって、細胞外からウィルスなどの固形物や、溶液などを取り込むという活動が行われています。これは細胞近傍の有害物質を無害化したり、高分子の栄養物質をとりこんだりするために行われています。細胞膜の１部を使ってしまいますが、考えようによっては細胞膜一部を更新するという新陳代謝を行っているともいえます。

集めた外界の物質などはエンドソームに集められ、次に内部がｐＨ５のリソソームと融合してファゴリソソームとなり、ゴルジ体から供給された数十種類の加水分解酵素が働いて消化活動を行います。これらの酵素はｐＨ５周辺が至適の酵素なので、細胞質に漏れ出ても細胞を破壊することはありません。ファゴリソソームでの消化が終了すると、ファゴリソソームはリソソームに戻って次の機会を待ちます（図２）。

ゴルジ体で作られた酸性が至適ｐＨの加水分解酵素群はそれぞれマンノース６リン酸と結合して、これがマーカーとなってレセプターと結合し、小胞でリソソームなどに運ばれます。ここでレセプターから離れた加水分解酵素は仕事をはじめます。エンドソームもリソソームほどではなくてもｐＨは酸性になっているので、加水分解は可能です。

リソソームシステムは細胞外の物質だけではなく、細胞内の物質も消化することがわかっています（１－４）。この場合ファゴソームはオートファゴソーム、ファゴリソソームはオートリソソームといいます（オートは自分自身という意味）。そしてこのような自己消化活動全体を指してオートファジーといいます。ド・ドューブの時代からオートファジーという現象があると言われていたのですが、その後細胞外から貪食作用（ファゴサイトーシス）によってとりこまれたものはリソソームシステムによって消化されるが、細胞内のものは消化されないとか、タンパク質のターンオーバーにはリソソームは関与しないという批判があり、さらにプロテアソームによる不要タンパク質分解機構が発見されるに至って、オートファジーは冬の自体を迎えることになりました（３）。

そのような冬の時代にも、出芽酵母（お酒やパンをつくるのに使われる酵母です）のオートファジーに関心を持っていたのが大隅良典（図３）で、彼は出芽酵母の突然変異体を５０００体作成し、そのなかからたったひとつのオートファジーを行わない突然変異体を分離しました（３）。この変異体は通常は普通に増殖しますが、栄養状態が悪くなると早死にしてしまいます。すなわちオートファジーとは飢餓時に自食することによって生きながらえるためのメカニズムであることが示唆されました。

最新科学や先進技術もその歴史をひもとくと、実は知らない人から見ると全く個人の趣味・カルトな興味・重要性が全く見いだせないとしか思えない研究に行き着く場合が多いのです。ＤＮＡを切り貼りしてゲノムを編集するなどという技術も、もとをたどれば、細菌がいかにしてウィルスの攻撃を逃れるかという「細菌の免疫機構」の研究から生まれた代物であって、最初からＤＮＡの改変を目的として開発された技術ではありません。大隅先生がよく基礎科学の重要性を強調されるのはそういうことだと思います。

もっとはっきり言えば、研究費はばらまくことが必要なのです。どんな研究が科学の飛躍的発展につながるかなんて、神様しか知ることはできないのです。ですから私は少額の科学研究費は抽選にしましょうと昔から主張しています。まともな研究者はそういうことがよくわかっているので、同じ研究分野の方々にこっそり３０万円づつ配っていた方もおられました。

出芽酵母は図４のようにゲノムが１セットのｎ世代と２セットの２ｎ世代があり、ｎ世代のα タイプと a タイプが接合することによって２ｎ世代がはじまります。このｎ世代（ゲノムが１セット）でも２ｎ世代と同様な状態で普通に生きられる生物であることが味噌です。１ヶ所の遺伝子の傷によって表現型が変化する可能性が高いので、遺伝学の世界では重宝されています。哺乳類だと精子・卵子以外はすべて２ｎなので、１ヶ所の傷だと＋／＋が＋／－になるだけで、健全な遺伝子が傷ついた遺伝子の働きを代替する場合が多く、遺伝子型と表現型は１：１に対応しません。研究に都合の良い素材を選ぶことは重要です。

出芽酵母の２ｎ世代は胞子をつくることができます。非常に興味深いことに、オートファジーができないミュータントは胞子をつくることができないそうです（３）。胞子は飢餓など環境の悪化に抵抗性の高い状態です。すなわち酵母のような１０億年前から生きているプリミティヴな生物においても、オートファジーは自食だけでなく、もっと複雑なサバイバル戦略の要になっていることがわかります。

大隅らの研究によって、オートファジーができないミュータントはＡｐｇ１というタンパク質が欠損していることがわかりましたが、次にはその他にオートファジーに関与しているタンパク質（遺伝子）はないのかということになります。これを実行したのが埼玉大学から東大駒場の大隅研にやってきた大学院生の塚田美樹でした（図３）。５０００体の変異体からわずかひとつだけしか分離できなかったオートファジーのミュータントを、彼女は３８,０００体の変異体から何と１５体も分離し、FEBS lett. に発表しました（５）。この論文がその後のオートファジー研究の出発点となりました。私もこの論文を読む機会があって、大変感動したことを覚えています。大隅は２０１６年のノーベル生理学医学賞を受賞しましたが、当時の研究室の思い出を弟子の方々がつづった思い出文集「駒場での大隅研究室」がウェブサイトで公開されています（６）。

塚田・大隅の論文が出版された頃にはもうヒトやマウスの全ＤＮＡ配列が解明されてきていて、酵母でオートファジーを担う遺伝子に対応した哺乳類の遺伝子も明らかになり、２０００年前後から一瀉千里に研究は発展しました。

オートファジーは真核生物全般に見られ、原核生物にはみられません。まず細胞質に脂質２重膜が２枚重なったようなお椀のような構造体が現れ、やがて球形に閉じて中身を閉じ込め（オートファゴソーム）、その外側の膜とリソソームの膜が融合してオートリソソームが完成します（図５、参照７よりコピー）。そのなかで構造体の分解消化が行われます。哺乳類でも酵母と同様、飢餓状態になると盛大にオートファジーが行われます。図５Ｃは飢餓状態にしたラットの肝臓のオートファジーを観察したものです。

水島（図３）によると、哺乳類では受精直後（卵巣から離れると、着床するまでしばらく母親が残したタンパク質を栄養源として生き延びる）、出生直後（へその緒からの栄養供給がなくなるので自食で補う）、成体が飢餓状態のような時にオートファジーが特に活発になるそうです（８）。もちろんオートファジーのシステムは普段から細胞内の老廃物を分解し、再利用したり廃棄したりするゴミ処理場の役割を果たしています。

変性したタンパク質はオートファジーだけでなく、プロテアソームシステムでも排除できますが、不良ミトコンドリアはオートファジーまたは未知のシステムを使わなければ排除できません（４）。赤血球からミトコンドリアを排除する際にも、オートファジーのシステムが使われているようですが、未知のシステムが関与している可能性も残されています（４、９、１０）。

タンパク質を分解するシステムは前記のようにプロテアソームというのがあるのですが、プロテアソームは多糖類や糖脂質を分解することはできません。したがってこれらを分解するリソソーム酵素が欠損すると、細胞内に不要な多糖類や糖脂質が蓄積して病気が発生します。どんな病気があるかは Lyso Life というサイト（１１）から主要なものだけコピペしておきました。詳しくはサイトをご覧下さい。

ゴーシェ病
グルコセレブロシダーゼという酵素の働きがなかったり、低くなったりしていることで、グルコセレブロシドという物質が分解されにくくなります。肝臓や脾臓が大きくなる、貧血や血小板の減少、骨症状などがみられ、けいれんや斜視（左右の目の視線が一致しない）などの神経症状が現れることもあります。

ファブリー病
α−ガラクトシダーゼ（α‐GAL）という酵素の働きがなかったり、低くなったりしていることで、グロボトリアオシルセラミド（GL-3）という物質が分解されにくくなります。手足の痛みや汗をかきにくいといった症状や、腎機能障害、心機能障害、脳血管障害などが現れます。

ポンペ病（糖原病Ⅱ型）
酸性α−グルコシダーゼという酵素の働きがなかったり、低くなったりしていることで、グリコーゲンという物質が分解されにくくなります。骨格を支える筋肉や呼吸に必要な筋肉の力が弱くなり、体重が増えにくい、心臓の働きが悪くなるなどの症状が現れることもあります。

ムコ多糖症Ⅰ型
α−L−イズロニダーゼという酵素の働きがなかったり、低くなったりしていることで、グリコサミノグリカン（ムコ多糖）という物質が分解されにくくなります。関節のこわばり、骨の変形、肝臓や脾臓が大きくなる、むくむくとした顔立ち、水頭症（頭の中に水がたまる）などの症状がみられ、知的な発達の遅れなどが現れることもあります。

ムコ多糖症Ⅱ型
イズロン酸−2−スルファターゼという酵素の働きがなかったり、低くなったりしていることで、グリコサミノグリカン（ムコ多糖）という物質が分解されにくくなります。関節のこわばり、骨の変形、肝臓や脾臓が大きくなる、むくむくとした顔立ちなどの症状がみられ、知的な発達の遅れなどが現れることもあります。

参照

１）C. De Dube, B. C. Pressman, R. Gianetto, R. Wattiaux and F. Applemans. Tissue Fractionation Studies
6. INTRACELLULAR DISTRIBUTION PATTERNS OF ENZYMES IN RAT-LIVER TISSUE. Biochem J. vol. 60(4): pp. 604–617.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1216159/

２）Alex B. Novikoff, H. Beaufay,  and C. De Duve. ELECTRON MICROSCOPY OF LYSOSOME-RICHFRACTIONS FROM RAT LIVER.  J. Biophys. Biochem. Cytol., Vol. 2, NO. 4, Suppl. pp.179-190 (1956)
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2229688/pdf/179.pdf

３）荒木保弘・大隅良典　「オートファジーを長き眠りからめざめさせた酵母」　領域融合レビュー, 1, e005 (2012)　DOI: 10.7875/leading.author.1.e005
Yasuhiro Araki & Yoshinori Ohsumi: Awakening the hibernation of autophagy research using yeast.
http://leading.lifesciencedb.jp/1-e005/

４）水島昇　「細胞が自分を食べる　オートファジーの謎」　ＰＨＰサイエンスワールド新書　ＰＨＰ研究所　（２０１１）

５）Miki Tsukada, Yoshinori Ohsumi., Isofation and characterization of autophagy-defective mutants of Saccharomyces cerevisiae., FEBS lett. Volume 333, number 1,2, pp. 169-174 (1993)
http://www.selectividad.pt/uploads/8/7/4/5/87451854/tsukada_et_al-1993-febs_letters.pdf

６）大隅良典先生ノーベル賞受賞記念思い出文集「駒場での大隅研究室」
http://bio.c.u-tokyo.ac.jp/file/OHSUMI.pdf

７）https://en.wikipedia.org/wiki/Autophagy

８）水島昇　哺乳類胚発生におけるオートファジーの役割を解明－マウス受精卵、自身の細胞内たんぱく質を分解して栄養に－
http://www.jst.go.jp/pr/announce/20080704/index.html?newwindow=true

９）H. Takano-Ohmuro, M. Mukaida, E. Kominami, K. Morioka., Autophagy in embryonic erythroid cells: its role in maturation. Eur. J. Cell Biol., vol. 79, pp. 759-764 (2000).

１０）S. Honda et al., Ulk1-mediated Atg5-independent macroautophagy mediates elimination of mitochondria from embryonic reticulocytes. Nat. Commun.  Jun 4; vol. 5: 4004. (2014) doi: 10.1038/ncomms5004

１１）http://www.lysolife.jp/about/about/kind.html