やぶにらみ生物論７６： 細胞骨格３

これまでにも述べてきましたように、マイクロフィラメントや微小管は細胞骨格というより、細胞移動・細胞内輸送・細胞分裂などを実行するためのツールであり、変動も激しくそのためにＡＴＰやＧＴＰを大量に使用します。それらと比較すると中間径繊維は安定で、形成にＡＴＰやＧＴＰを必要としないので、細胞骨格という名前にふさわしいかもしれません。

中間径というのは、約６ｎｍ径のマイクロフィラメントと約２５ｎｍの微小管の中間のサイズ＝約１０ｎｍという意味です。

図１はケラチンを例にとりましたが、Ⅰ型とⅡ型のケラチンがヘテロ２量体をつくり、そのヘテロ２量体がアンチパラレルに結合して４量体を形成し、それらが４本集まってプロトフィブリルを形成します。プロトフィブリルが多数集まって、中間径繊維ができあがります。このような構造を形成するためにＡＴＰやＧＴＰは消費しません。

中間径繊維も伸長や短縮を行いますが頻繁ではなく、基本的には細胞の形態を決めるのに役立っているとも言えますが、実際にはそんなに単純ではなくて、例えばケラチンの場合、その生理的意義は多岐にわたっており、角化によって水分の蒸発を防ぐ、細菌やウィルスの侵入を防ぐ、紫外線のダメージを吸収する、体温を維持する、捕殺や負傷を防ぐ、敵を突き殺す、指先に力を与える、蹄で体重をささえて走る、羽毛で空を飛ぶ、など数えきれません。

中間径繊維を構成するタンパク質は図２のように多数のグループがあり、通常それぞれのグループに複数の種類のタンパク質が所属します。グループを越えて複合的な繊維をつくることは一般的にはありません。ケラチンは上皮組織、ビメンチンは間充織、デスミンは筋肉、ニューロフィラメントは神経など特定の組織で発現するタンパク質が多いのですが、ラミンだけは例外的に広汎な組織にみられます。

各タンパク質の分子構造をみていきますと、図３のように、すべてＮＨ２側（Ｎ末）とＣＯＯＨ側（Ｃ末）にαヘリックスやβシートを形成しない領域があり、中央にαヘリックスからなるロッド領域があるという形で、３つのドメインで構成されています。ロッド領域は２～３ヶ所の非αヘリックスリンカーで分断されています。

ロッド領域で多数の分子がパラレルに結合することによって太いケーブルが形成され、Ｃ末とＮ末がタンデムに結合して長いケーブルとなります。他の分子はすべて細胞質にありますが、ラミンだけは核にあるのでＣ末ドメインに核局在配列が存在します。（分子量は５万～７万です）。

ケラチンは注意深くない生化学者には嫌われているタンパク質です。というのはラーメン店でスープを指にかけながら持ってくるウェイトレスのような研究者もいて、電気泳動槽のバッファに指をちゃぽちゃぽ浸しながら移動させることがあるので、そうなると皮膚のケラチンが検出されます。風呂に入っていない研究者だとフケが落下したりもします。

ケラチンにはＳＨが多く（髪が焦げると硫黄の臭いがします）、となりの分子のＳＨと結合してＳＳ（ジスルフィド結合）を形成するので、分子の独立性は失われ、やや大げさに言えば毛髪・爪・角・鱗などはひとつで１巨大分子ということになります。ケラチンは肝臓のような柔らかい組織にもあるので、存在場所に応じて多くの種類があります。ヒトを含めて動物は数十種類のケラチン分子種すなわち遺伝子を保有しています。

ケラチンを発見したのは誰だか判りませんが、１６世紀の中国の薬草学者李時珍（Li Shih-chen　図４）が治療に用いていたことが、私は未読ですが、彼の大著「本草綱目Compendium of Materia Medica」から読み取れるそうです（１、２）。最初にケラチン遺伝子の配列を決めたのはハヌコグルとフックスです（３、図４）。

これはややめずらしいことだと思いますが、たとえばヒトの場合、Ｉ 型ケラチングループの各遺伝子は第１７染色体の特定部位に、ＩＩ 型ケラチングループの各遺伝子は第１２染色体の特定部位にぎっしりかたまって存在しています。しかも上皮ケラチン・毛根鞘ケラチン・毛＆爪ケラチンはそれぞれクラスターを形成しています。偽遺伝子もいくつかみつかっています（図５）。ケラチンの大きな特徴として、表皮・毛髪・爪・角・鱗などの死細胞においても、垢・雲脂・生え替わりなどで外界に廃棄されるまで、その機能を果たしていることが上げられます。

ビメンチン（分子量５７，０００）は発見者がはっきりしています。ドイツのマックス・プランク研究所の　Franke WW, Schmid E, Osborn M, and Weber K.　です（４）。オズボーンとウィーバー（夫妻）は生化学に手を染めた者なら誰でも使ったことがある米の飯のような「ＳＤＳ－ＰＡＧＥ」という分析法を開発したことで有名な研究者です（図６）。フランケは近年はアンチ・ドーピングの研究者としても有名です（５、図６）。

図７Ａはマウス胎児の皮膚で私が撮影したものですが、ビメンチンが茶色に染まっています。表皮や毛包の上皮性組織はほとんど染まらず、間充織である真皮や毛乳頭はよく染まっていることがわかります。違いが明白なので、腫瘍が上皮性か間充織性かを判別するのに、ビメンチンの染色が使われています。図７Ｂは細胞内におけるビメンチンの分布です。核を包み込むような感じですが、ミトコンドリアや小胞体と結合する場合もあるようです（６）。

ビメンチンの機能はかなり微小管が代替することができるようではっきりとわかっていませんが、細胞に弾力を与えたり、オルガネラを保護するような役割があるようです（６）。ビメンチンの遺伝子を欠損すると負傷からの回復が遅れるという報告もあります（７）。

デスミン（分子量５３，５００）は筋細胞に特異的に存在するタンパク質で、デスミンがつくる繊維は細胞骨格と言うより筋組織のパーツとしての役割を担っています。。ラザリデスのグループによって発見され（８）、遺伝子配列はLi Zhenlin（９）らによって解明されました。デスミン遺伝子を欠損させたマウスでは、正常な筋肉組織が形成されないことが明らかになっています（１０）。デスミン遺伝子の突然変異によるヒト筋肉疾患も報告されていま（１１）。

デスミン繊維は横紋筋細胞では図８のように配置されていて、筋原繊維のＺディスク同士、Ｚディスクと筋鞘（サルコレンマ）のコスタメア、Ｚディスクとミトコンドリアや核を連結しています（１２）。

ニューロフィラメントは神経細胞に特異的に出現する中間径繊維で、発見者は F.C. Huneeus & P.F. Davison です（１３）。構成しているタンパク質は３種類の分子量がかなり異なるアイソフォームで、それぞれNF-H （分子量 200-220 kDa）、 NF-M （分子量145-160 kDa）、 NF-L （分子量68-70 kDa）と命名されています。軸索の内径を広げて、神経伝達がスムースに行われるようにするという説があります（１４）。

類似したタンパク質にα－インターネキシン（分子量66kDa）というのがありますが、図９のようにニューロフィラメントタンパク質（グリーン）とは異なる細胞（図９の場合は未分化な神経細胞　レッド）に発現する場合があります。神経細胞にはこの他にネスチン、ペリフェリンなどの中間径繊維形成タンパク質も発現します。

最後にラミンですが、ラミンだけは核に局在しているタンパク質で、ラミン繊維は核ラミナと呼ばれる核膜を裏打ちしている構造となっています。初期の研究は Aaronson RP と Blobel G によって行われました（１５）。１０年後には遺伝子配列も明らかになりました（１６）。

ラミンは真核生物が出現すると同時に生まれたのではないようです。ヒドラからヒトまですべての動物（後生生物）にあるのですが、植物・カビ・単細胞生物は持っていません。このことはラミンが動物独特の体細胞分裂に関与していることを示唆しています（１７、１８）。また核内での染色体の位置決めとかＤＮＡの転写にも関与しているかもしれません（１８）。

ラミンにはＡタイプとＢタイプがあり、それぞれ別の遺伝子にコードされています。ＣタイプとＡタイプは同じ遺伝子にコードされており、選択的スプライシングによって生成されたものです。Ｃタイプも含めたＡタイプは胎生期にしか発現しません。一方ＢタイプはＢ１・Ｂ２が別の遺伝子にコードされており、これらはすべての細胞に認められます。ＡタイプはＢタイプから進化的に派生したと考えられています（１７、１８）。

とは言っても、Ａタイプラミンの機能をＢタイプラミンが代替できるわけではなく、マウスではＡタイプラミンの欠損によって、成長が著しく遅れ、筋ジストロフィーが発生するそうです。またラミンＢの欠損は致死です（１８）。ラミンの局在は、参照に記載したサイトをご覧ください（１９－２２）。

参照

１）Compendium of Materia Medica：https://en.wikipedia.org/wiki/Compendium_of_Materia_Medica

２）The discovery of keratin. http://keratininformation.weebly.com/discovery.html

３）Hanukoglu, I.; Fuchs, E., "The cDNA sequence of a human epidermal keratin: divergence of sequence but conservation of structure among intermediate filament proteins". Cell. vol. 31 (1): pp. 243–252.  (1982) doi:10.1016/0092-8674(82)90424-X. PMID 6186381.

４） Franke WW, Schmid E, Osborn M, Weber K. Different intermediate-sized filaments distinguished by immunofluorescence microscopy. Proc Natl Acad Sci USA vol. 75: pp. 5034-5038 (1978)

５）http://www.sueddeutsche.de/sport/anti-doping-experte-werner-franke-in-der-zweiten-halbzeit-wirkt-sich-epo-fantastisch-aus-1.2379897

６）https://en.wikipedia.org/wiki/Vimentin

７）Eckes B, Colucci-Guyon E, Smola H, Nodder S, Babinet C, Krieg T, Martin P., "Impaired wound healing in embryonic and adult mice lacking vimentin.". Journal of Cell Science. vol. 113: pp. 2455–2462. (2000) PMID 10852824.

８） Izant JG, Lazarides E.,  "Invariance and heterogeneity in the major structural and regulatory proteins

of chick muscle cells revealed by two-dimensional gel electrophoresis". Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. vol. 74 (4): pp. 1450–1454. (1977) PMC 430794 Freely accessible. PMID 266185. doi:10.1073/pnas.74.4.145

９）Li Zhenlin, Alain Lilienbauma, Gillian Butler-Browneb, Denise Paulin., Human desmin-coding gene: complete nucleotide sequence, characterization and regulation of expression during myogenesis and development., Gene, vol. 78, Issue 2,  pp. 243–254 (1989)
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0378111989902278

１０）Capetanaki Y1, Milner DJ, Weitzer G., Desmin in muscle formation and maintenance: knockouts and consequences., Cell Struct Funct., vol. 22(1): pp. 103-116. (1997)
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9113396

１１）デスミンミオパシー，デスミン遺伝子の突然変異による心筋ミオパシーを伴った骨格筋ミオパシー：　
http://www.nejm.jp/abstract/vol342.p770

１２）Panagiotis Koutakis et al., Abnormal Accumulation of Desmin in Gastrocnemius Myofibers of Patients with Peripheral Artery Disease: Association with Altered Myofiber Morphology and Density, Mitochondrial Dysfunction and Impaired Limb Function., Journal of Histochemistry and Cytochemistry (2015)
https://www.researchgate.net/publication/270705709_Abnormal_Accumulation_of_Desmin_in_Gastrocnemius_Myofibers_of_Patients_with_Peripheral_Artery_Disease_Association_with_Altered_Myofiber_Morphology_and_Density_Mitochondrial_Dysfunction_and_Impaired_Li

１３）F.C. Huneeus. and P.F. Davison,  Fibrillar proteins from squid axons: I. Neurofilament protein, Journal

of Molecular Biology, vol. 52, Issue 3, pp. 415-418 (1970).
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0022283670904109#

１４）https://en.wikipedia.org/wiki/Neurofilament

１５）Aaronson RP, Blobel G., Isolation of nuclear pore complexes in association with a lamina. Proc Natl Acad Sci vol. 72: pp. 1007–1011 (1975)
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2964183/

１６）McKeon FD, Kirschner MW, Caput D., Homologies in both primary and secondary structure between nuclear envelope and intermediate filament proteins. Nature 319: 463–468 (1986)

１７）https://en.wikipedia.org/wiki/Lamin

１８）Thomas Dechat, Stephen A. Adam, Pekka Taimen, Takeshi Shimi,and Robert D. Goldman, Nuclear Lamins., Cold Spring Harb Perspect Biol;2:a000547　(2010)

１９）http://www.abcam.co.jp/lamin-b1-antibody-nuclear-envelope-marker-ab16048.html

２０）http://www.abcam.co.jp/lamin-a-antibody-ab26300.html

２１）https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/antibodies/primary-antibodies/cell-marker-antibodies/lamin-ac-antibodies.html

２２）http://ruo.mbl.co.jp/bio/dtl/A/?pcd=PM064