透過型電子顕微鏡 その２ 包埋

翌日朝に、まずマジックインクのマークを見て、プロピレンオキサイドがきちんと揮発したかどうか確認します。確認したらフリーザーで保管しておいた包埋剤を部屋に出してとかします。２０℃くらいの部屋だとすぐにとけます。プロピレンオキサイドを揮発させたサンプルに、液化させた包埋剤を３ｍｌ加えてローテータで２時間まわします。

竹串（やきとり用など）数本をオーブンなどで乾燥させておきます。ローテータで回しているうちに浮かんでくるサンプルがあるので、ときどき竹串で下に落とします。パスツールピペットをやすりで切断して、穴の直径が３ｍｍくらいのピペットをつくります。包埋剤は非常にに粘度が高いので、穴が大きいピペットでないと吸えませんし、駒込ピペットを使ったりすると洗浄出来ないので使用後捨てることになります。これはちょっともったいないでしょう。

２時間ローテータで回した後、上記ピペットで包埋剤を捨て、新しい包埋剤３～４ｍｌを加えてまた２時間回します。さらにもう一度この過程を繰り返して、合計６時間ローテータでの処理を行います。この間暇なので、ガラスナイフ製造器を使ってガラスナイフを少なくとも１ダースくらいは作っておきます。

ガラスナイフの作成（↓の図４など参照）
http://etech.engg.nagoya-u.ac.jp/gihou/v10/021.pdf

市販の包埋板を用意します。シリコンゴム板にサンプルを入れるへこみがあるものです。このへこみひとつに１個の標本を入れ、竹串を使って方向を決めます。包埋剤をすりきりより少し多めに加えます。小さなたこ焼きのような感じです。全部入れたらシリコン板を真空脱気します。真空脱気すると液が減ってしまうので、別途真空脱気した包埋剤を少しづつ加えて、すりきりよし少し多いくらいの感じに戻します。サンプルの位置がずれた場合は竹串でよい位置に移動させます。

包埋板ごとサンプルを熱処理して包埋剤＝樹脂を以下の手順で固めます。
３７℃で１２時間　→　２４ｈｒかけて３７℃から６０℃に温度を上げる（オーブンにプログラムが組み込まれているはず）→６０℃で２４時間。最後の６０℃処理は時間がのびてもかまいません。終了したらサンプルを取り出し、小箱にいれてデシケータに保存します。

ここまでで作業を始めてから１週間が経過します。

（つづく）